灵芝已进入全面开发应用时候，不但菌体要完整的充分利用，灵芝来源的特殊基因，包括可以表现多种疗效的免疫调节蛋白基因，以及可以应用在环境保护和生物复育的漆氧化酶基因，将开启另一波功能性基因体与蛋白质体研究的热潮。以灵芝为表达系统作为生产特定蛋白质的分子农场，将带动灵芝产业与市场无限提升的可能。
文／许瑞祥
◎本文原载於 2005年《农业生技产业季刊》第3期 37～44页
一、灵芝制品发展现况
灵芝在中华文化里，无论从稗官野史中起死回生的仙草，到历代官方文书中加官晋爵的太上之药，皆显示中华民族与灵芝深厚的渊源。从公元前一世纪的《神农本草经》到明朝李时珍的《本草纲目》，一千六百年间不断修正补充有关灵芝的分类、气味、药性和主治功效等的论述，奠定了灵芝是扶正固本、滋补强壮珍贵药材的理论基础（许，1993）。
1950 年代开始灵芝的大量人工栽培後，为灵芝的科研及产品开发提供了充足的原料。1970 年代中国大陆地区所发表临床报告指出灵芝制剂对慢性支气管炎、哮喘、冠心病、心绞痛、高脂血症、神经衰弱、肝炎、白血球减少症等有很好的疗效，此结果证实了古籍所述对灵芝的药用价值，也引发现代医药学界对灵芝进行化学组成与药理研究的高度兴趣。
经过三十年的药理研究结果确认灵芝的萃取物中，具有镇静、镇痛、镇咳、强心、保肝、降血压、降血脂、降血糖、降胆固醇、抗过敏、抗发炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化与免疫调节功能等的活性成分，而广受各国的重视（许，1993；林，2001）。根据 2005 年张树庭教授的估计，全球灵芝产品的年产值超过25 亿美元，市场主要集中在中国、日本、韩国、台湾等国家地区（Chang, 2005）。
1980 年代台湾开始灵芝子实体的大量栽培，除了供应日本所需的原料外，也带动了国内灵芝研究的风气，1987 年国科会主导推动灵芝大型研究计画後，不但引爆了台湾灵芝研究的热潮，也开创了灵芝市场在台湾的黄金岁月，1990 年代，灵芝相关产品的营业额估计已达新台币 60 亿以上，成为当时健康食品的代表。1999 年的健康食品管理法公布实施後，健康食品由一般名词成为法定名词後，结束了昔日百家争鸣的局面，为台湾灵芝市场提供可以标示功效的健康食品，也为业界提供产业升级的空间。
中国是全球灵芝产品最多元的地区，除了药品级的针剂、锭剂、胶囊、蜜丸和糖浆等，与保健食品级的胶囊、口服液和冲剂外，亦有食品或化妆品添加灵芝者。2000 年版的《中华人民共和国药典》中，收载了灵芝作为法定中药材。中国卫生部也批准灵芝作为食品新资源，从中国法律的立场确认灵芝为药食兼用的地位（林，2001）。
二、灵芝菌体的开发应用
(一)灵芝活性成分研究成果
1. 多糖体
1971 年 Sasaki 等人发表树舌灵芝（G. applanatum）的多糖体具抗肿瘤活性的论文後，使得多糖体成为灵芝第一项被证实的活性成份（Sasaki et al, 1971）。
在灵芝的药理研究中，抗癌活性是最早被发现的。而灵芝多糖体被认为是抗癌活性的主要成份，但其作用并非是直接杀死或抑制癌细胞。目前已知灵芝多糖体是经由提高免疫力来间接表现其抗癌活性。灵芝多糖体对免疫细胞具有广泛的作用，如促进白细胞素-2（IL-2，也称介白素 2）分泌而增加 T 细胞数目及功能（Lai and Lin, 1992），增强 T 细胞多聚酶α活性促进其 DNA 合成，而增殖 T 细胞，并可增强自然杀手细胞的能力（Lai and Lin, 1991）。
灵芝多糖体对於单核球的巨噬细胞作用，会使其表现出生吞噬能力增强、溶酶体活性增高及促进产生抑制肿瘤生长的细胞激素如 IL-1、IL-2、IL-6、INF-α、INF-γ 等的合成与释放（Lieu et al, 1992）。并经由强化自然杀手细胞和巨噬细胞直接攻击不正常的肿瘤细胞，达到防癌、抗癌的效果。因此灵芝多糖体除了用於抗癌作用外，对於各种免疫缺陷疾病，如老年人的自然免疫衰退或後天免疫不全症（AIDS）应有积极的应用价值。
虽然灵芝多糖体的效用明确，但由於其分子量相当大，通常在数万到百万之间，如此巨大的物质如何进入细胞中参与一连串复杂的免疫反应，一直是想了解其作用机制的前提。但是不同物种来源的灵芝多糖体是否皆相同呢？此类具有β（1-3）主链和β（1-6）支链的葡萄糖聚合物，原本被认为是一般高等真菌细胞壁的基本组成，经热水或硷性溶液萃取後再经酒精沈淀而得。
根据日本水野卓教授多年的分析结果显示常见的三种灵芝 G. applanatum、G. lucidum、G. tsugae 其萃取所得的多糖体和其抗癌的有效成分间是不相同的。以树舌灵芝（G. applanatum）的多糖体而言，其分子量在百万以上，且几乎为纯的葡萄糖聚合物。但在 G. lucidum 和 G. tsugae 来源的多糖体中则含有不同百分比的蛋白质，显示其为糖蛋白的聚合物，且各种组成间的抗癌活性亦不相同。此结果显示，要比较灵芝多糖体的效果时，首先必须确认灵芝种源的差异性（Wang et al，1993）。
灵芝多糖体的抗肿瘤机制经荣总王声远教授发表从细胞激素的证据，说明灵芝多糖体能抑制肿瘤细胞的增殖作用是透过免疫系统中的巨噬细胞和 T 淋巴细胞产生的 TNF-α 与 IFN-γ 协同作用的结果（Wang et al, 1997），最近的研究显示不同子实体来源的灵芝多糖体，如 F3、GLPS、PS-G 等，活化免疫细胞如巨噬细胞或突触细胞产生介白素-1（IL-1）等的胞内讯息，是经过细胞表面 TLR4（Toll-like receptor-4）受体向内传递（Hsu et al, 2004；Lin et al, 2005）。
2. 三萜类
1982 年，Kubota 等从灵芝 G. lucidum 的子实体中萃取而得特殊的三萜类化合物命名为灵芝酸 A、B（ganoderic acid A、B）後（Kobota et al, 1982），迄今至少有 119 种新的三萜类化合物自灵芝的子实体、菌丝体和担孢子中被发现。1999 年 Kim等依其结构分为十种类型。灵芝三萜类的药理研究结果，包括毒杀癌细胞株、抗 HIV 病毒、抗氧化、抗过敏、抗高血压、保肝等作用（Kim and Kim, 1999）。
由此可知丰富的三萜类化合物提供了灵芝多样的生理活性，但一百多种的三萜类化合物并非稳定的存在同一物种中，而会随着菌种、栽培方式、采收时期与萃取程序等的不同，改变其中三萜类的组成与含量。
三、灵芝基因的开发研究
(一) 免疫调节蛋白质基因的研究进展
灵芝的另一种活性物质，免疫调节蛋白，於 1989 年由日本学者 Kino 等人自 G. lucidum 菌丝体中分离出来，命名为 LZ-8（Ling Zhi-8）。LZ-8 由110 个胺基酸所组成（图一），分子量为 12,420 Da，并且与免疫球蛋白重链区之可变区域的胺基酸序列及二级结构有某程度的相似性（Tanaka, 1989）。
图一 LZ-8 之胺基酸序列与二级结构图（Lin, 1997）
LZ-8 原态是以同源双体（homodimmer）的形式存在，具有促进淋巴球增殖以及抑制系统性过敏反应（systemic anaphylaxis reaction）和局部过敏反应（arthus reaction）的作用。此外，LZ-8 对於绵羊红血球会产生凝集作用，对人类红血球却不发生任何凝集反应（Kino, 1989），这显示 LZ-8 在人体医学上有其应用之潜力。
自 1989 年 Kino 发现 LZ-8 可刺激鼠科脾脏细胞增殖，以及避免局部性和系统性过敏反应，後续更有研究指出 LZ-8 可以有效抑制非肥胖性糖尿病鼠（nonobese diabetic, NOD）的自体免疫性第一型糖尿病之发生（Kino, 1990）。
此外，LZ-8 在胰脏异体移植方面可以显着延缓排斥的时间。相较於其他免疫调节药物（immunomodulatory drug），如 CsA（cyclosporin A，来自真菌具有免疫抑制作用的胜肽）和 FK506（tacrolimus，由土壤真菌所分泌具有免疫抑制作用的抗生素）对於胰脏皆有毒害的危险，但 LZ-8 对於胰岛细胞则没有发现有任何毒害作用（ven der Hem, 1995）。
自 LZ-8 序列发表後，台大医学院生化所也成功自松杉灵芝（G. tsugae）菌丝体中纯化出分子量约 13 kD 的免疫调节蛋白，命名为 FIP-gts（fungal immunomodulatory protein-gts）。经胺基酸序列分析，发现其序列与 LZ-8 完全相同。 LZ-8 不但可以促进人类周边淋巴球细胞（human peripheral lymphocytes）和小鼠脾脏细胞增生，由细胞摄入 3H-thymidine 之量对蛋白质浓度作图，可得一钟形图：在浓度为 5 μg/ml 时，对人类周边淋巴球细胞可达最高之增殖作用。利用 RT-PCR 方法也可证实 LZ-8 可促进细胞激素如：间白细胞素（IL-2、IL-4）、干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF-α）之表现（林，1997）。
中山医学大学毒理学研究所研究结果显示，以 FIP-gts 喂食尘蟎致敏小鼠两周後发现，可使致敏後小鼠增高之噬硷性白血球比例，降回至正常值范围。显示 LZ-8 的免疫调节功能可以辅正体内过度的免疫反应，加以预防或治疗目前罹患率日趋增加的过敏性疾病（黄，2003）。
除此之外，在一些非灵芝属的菇类中也可纯化出分子量约 13 kD 的免疫调节蛋白，例如：金针菇的 FIP-fve （Ko et al., 1995）和草菇的 FIP-vvo （Hsu et al., 1997）。经胺基酸序列分析，LZ-8、FIP-fve 和 FIP-vvo 共有 51 个相同胺基酸（图二），且均含有与免疫球蛋白重链的可变区域相当之相似性。因此可推论，由灵芝、金针菇和草菇所纯化出之免疫调节蛋白，在演化上可能都是来自同一祖先。
图二 FIP-gts 、FIP-fve 及 FIP-vvo 胺基酸序列比较（Lin et al. 1997）
2005 年本研究室完成针对灵芝属 G. applanatum、G. boninense、G. formosamun、G. fornicatum、G. lucidum、G. microsporum、G. neo- japonicum、G. oerstedii、G. resinaceum、G. sinense、G. tropicum、G. tsugae、G. valesiacum、G. weberianum 等菌株进行聚合酶连锁反应分析结果，将近 50 株不同菌种的灵芝中，均可得到片段大小相同的基因产物，显示免疫调节蛋白 LZ-8 相似基因普遍存在於灵芝属菌株中，但是这些菌株所得之基因序列并非皆与 lz-8 相同，部分菌株更发现同时具有两种以上的 LZ-8 相似基因。
此外采用 genome walking 技术於 G. microsporum 及 G. fornicatum 分别选殖出三条灵芝属免疫调节蛋白新基因 gmi、gfo-1 与gfo-2 。将 lz-8、gmi 及 gfo-1 等基因转殖入 Pichia pastoris KM71 以甲醇诱导方式进行胞外表现，可得重组蛋白 rePLZ、reGMI 及 reGFO-1 ，经 MALDI- TOF 质谱分析结果显示，重组蛋白并无任何醣基化现象，最後目标蛋白产量平均可达 300 mg/L。
重组蛋白进行免疫调节活性测定，皆可刺激 BALB/c 老鼠骨髓之树突细胞（dendritic cells, DCs）分泌 IL-12 ，也可刺激老鼠巨噬细胞株 J774A.1 分泌 TNF-α 及刺激人类 T 细胞株 Jurkat cells 分泌 IL-2 ，其中 reGMI 於 5 μg/mL 下可刺激 DCs 分泌 IL-12 的量为相同浓度 rePLZ 之六倍（林，2005）。
除了将不同的灵芝免疫调节蛋白质基因大量表现於 Pichia pastoris 外，亦已将表现於大肠杆菌、乳酸菌、糖化酵母菌以及麴菌中，後续进行的生理活性测试，期望能筛选出容易生产、更具疗效的新型免疫调节蛋白。
图三 LZ-8 与十种灵芝属免疫调节蛋白部分胺基酸序列之比对（林，2005）
(二) 漆氧化酶基因
纤维素、半纤维素、木质素是自然界中存量最多的大分子物质，其中木质素由於结构复杂最难以分解。已知有三种酵素具有分解木质素之功能分别为漆氧化酶（laccase, 1.10.3.2）、含锰过氧化酶（manganese peroxidase, 1.11.1.13）和木质素氧化酶（lignin peroxidase, 1.11.1.14）。
其中的漆氧化酶为积极开发的工业用酵素之一，在制酒过程，漆氧化酶可作为澄清剂，帮助除去白葡萄酒原液中的酚类物质（Servili et al., 2000）。在纸浆工业上，漆氧化酶用於提升木质素的分解效率（Leonowicz et al., 2001）。在工业废水处理中漆氧化酶能有效分解多种染剂（Abadulla et al., 2000）。
在生物复育上，漆氧化酶能够分解环境中多种苯环类的有毒物质（Mougin et al., 2000）。另有文献指出将漆氧化酶基因转殖到 S. cerevisiae 中，可以增加 S. cerevisiae对於木质纤维水解发酵液中酚类化合物的耐受性，进而提高燃料乙醇的生产率（Larsson et al., 2001）。 Li 和 Steffens 将漆氧化酶基因转殖到番茄中，转殖株氧化酚类物质的能力增强，对致病细菌抗性增加（Li and Steffens, 2002）。
有关灵芝属真菌漆氧化酶之研究，许发表以漆氧化酶同功酵素图谱进行灵芝属分类之研究，发现灵芝属真菌具有多种不同分子量之胞外漆氧化酶，其表现会随着培养时间的不同而改变（许，1990）。Ko等人发现灵芝单核体（G. lucidum 7071-10）具有三种漆氧化酶同功酶（isozymes），分别进行纯化之结果，其中 Galc3 在 pH3-pH10 具有良好的稳定性，具有应用上的潜力（Ko et al., 2001）。在而 D'souza 等以不同的培养条件对灵芝漆氧化酶进行诱导，添加 Veratryl alcohol 能明显提高胞外漆氧化酶的活性到0.2 U/mL（D'souza et al., 1999）。
本研究室以漆氧化酶基因之保守性序列设计引子，对11株灵芝属真菌基因进行聚合酶链锁反应，将产物定序，共得到 26 条漆氧化酶基因序列，交互比对结果显示，灵芝属真菌各具有两条以上的漆氧化酶基因，将选殖之序列与相关物种之漆氧化酶基因序列进行演化计算，发现灵芝属真菌之漆氧化酶可分为三种类型，其中第一类型与第二种类型可分别再分为两群，序列比对与演化分析显示，这三类型基因皆有属於自己不同的非转译区（intron），可能是来自独立演化的结果，其中第三类的漆氧化酶基因在灵芝属与云芝属的分类形成前就已出现，结果如图四所示。
图四 以漆氧化酶基因之保守性序列设计引子，对11株灵芝属真菌基因进行聚合酶链锁反应的结果。
自灵芝属真菌 G. lucidum 、G. tsugae 、G. fornicatum 中，分别选殖出漆氧化酶基因 RZ.lac4 、0814.lac1 、1109.lac1，基因全长依序为 2121 bp、2019 bp、2110bp，皆具有 9 个 intron，其蛋白质各具有 520、521、521 个胺基酸，其中前 21 个胺基酸为 signal peptide ，在保守性 Cysteine 之後第十个胺基酸为 Phenylalanine，显示三者皆属具有高还原电位之第三类漆氧化酶。
使用 AOX1 起动子，将所选殖之 1109.lac1 基因转殖入嗜甲醇酵母 Pichia pastoris KM71 进行异源表现，所得之重组蛋白质具有漆氧化酶活性，最适反应 pH 值为 3.0，最适反应温度为 65°C 。以 BMMHY 为诱导培养基，以 30°C、0.5% 甲醇诱导七天，所得之胞外上清液活性为 6.6 U/ml ，比活性为 81.7 U/mg 。重组蛋白 re1109.lac1 在55°C 下反应二十四小时仍保有将近 100% 的活性，显示此异源表达的漆氧化酶具有应用与开发的价值性（戴，2005）。
四、以灵芝作为基因转殖作物的开发研究
基因转殖作物是生技产业中相当重要一项研发项目，由 1970 年末至 1995 年间，许多农业生技公司投入基因转殖植物的研发，依 Global Industry Analysis 统计，2000 年农业生技的市场产值美金 27 亿元，其中基因转殖作物就占其中之美金 21 亿元。2004 年市场成长至美金 30 亿元，2010 年将成长至美金 60 亿元，平均年成长率为 11.2%。
基因转殖作物的研发大致可分为三阶段，1995～2002 年，第一代作物的发展目的是在改变作物特性，例如抗虫、疾病、耐除草剂、增加产量、加速生长及保鲜等，以降低成本。第二代作物是从 2003 年开始，预期会持续到 2010 年左右，主要目标在增加作物营养价值，如添加β胡萝卜素的黄金米及甜甜米、高维生素作物等，以期食用者食用时达到保健目的。
第三代基因转殖作物发展预计将从 2010 年开始，以基因转殖作物生产人类医药品，称之为分子农场（Molecular pharming、biopharming 或 pharming）。分子农场指的是利用基因转殖动植物生产具有医药用途或其他具有商业价值之产物，它的目标是提供一个相对安全、大量且便宜的生产方式。其中基因转殖作物是最具有经济效益的工业用或医疗用重组蛋白生产方式，目前分子农场的研发目标包含生产特用产物以及开发食用疫苗等，其中以生产特用产物，例如抗体、膜蛋白、人体酵素和开发食用疫苗最具潜力。
除了植物以外，丝状真菌同样具有发展潜力。在 1980 年代就开始以麴菌（Aspergillus spp.）从事牛凝乳酶（chymosin）商业生产，人类的免疫球蛋白也可以麴菌生产，以麴菌表现 B 型肝炎病毒抗原的成果更显示，使用丝状真菌生产类病毒颗粒（virus-like particle）的可行性。因此丝状真菌，在分子农场的开发应用具有无限的潜力。
尤其是菇类，除了具备丝状真菌等微生物之特性外，更是大众所喜爱的食物，菇类同时具有微生物和植物的优点，不但生长快速、易於操作，相较於植物更容易於密闭的环境中栽培，且基因无法跨种传递，大幅降低基因污染风险，因此以菇类表达异源基因系统的开发更有其必要性，除了可取代目前已有的植物系统外，更可开发新应用领域，将分子农场的价值扩大。
以育种的角度而言，传统育种耗时费力，所以近年来，研究人员希望使用细胞融合、基因重组等新生物技术，改进菇菌的性状达到育种的目标。开发中的菇菌基因转殖系统，将导入特定外来基因片段於菇菌细胞染色体内，待外来基因启动表现後，除了分子育种的应用之外，还可将菇体视为新的表达系统，成为生产特定蛋白质的分子农场。目前利用农杆菌进行洋菇基因转形主要以荷兰、英国及美国为主（Burns et al., 2005， Chen et al., 2000），日本以则化学法或电穿孔法进行香菇基因转形，皆已在菌丝体中成功表现出绿色萤光蛋白（green fluorescent protein）（Hirano et al., 2000）。
灵芝为重要的药用真菌，已有长期分子层次的研究的基础，自然成为东方国家发展菇菌基因转殖系统的优先选择。中兴大学植物所曾经以泛宿主载体 pAN7-1 上的抗 hygromycin B 基因 hph 为筛选标志建立其基因标的转形系统。由灵芝单核菌丝制备的原生质体进行聚乙二醇-氯化钙法转形後，分析所有不同的转形株发现其菌落形态、生长速率与抗 hygromycin B 能力不一（1998）。
2001 年中国首先发表以香菇来源的 GPD promoter 启动以电穿孔法转形的绿色萤光蛋白基因与其他报导者基因於双核的灵芝菌丝体中，并在萤光显微镜下成功观察到被激发绿色萤光的转形株（Sun et al., 2001），灵芝基因的转形系统与其他食用菇几乎同时被建立。2004 年韩国发表以 restriction enzyme-mediated integration 的方法进行灵芝单核菌丝基因的转形，不但可以提高转形率并且有助於转形株的筛选（Kim et al., 2004）。
五、结论
千万年来灵芝一直与人类共存於世，扮演生态环境中分解者的角色。它可分解植物残体中的纤维素和木质素，促进碳元素循环。虽然在过去百年间，东西方科学家以严谨的态度研究灵芝，却因分类指标不够明确，忽略了彼此使用材料的差异，因而影响了对灵芝研究结果的整理和评价。生物科技与分子生物技术相结合进行的灵芝系统化研究，已经可以彼此校正过去使用的灵芝菌株间种源的差异性。
现在的灵芝已进入全面开发应用时候，不但菌体要完整的充分利用，灵芝来源的特殊基因将开启另一波功能性基因体与蛋白质体研究的热潮。以灵芝为表达系统，作为生产特定蛋白质的分子农场，将带动灵芝产业与市场无限提升的可能。
参考文献
1. 林志彬，2001，灵芝的现代研究，北京医科大学出版社。
2. 林文辉，1966，松杉灵芝免疫调节蛋白的构造与作用机制之研究，硕士论文，台湾大学医学院生化学研究所。
3. 林采菱，2005，灵芝属免疫调节蛋白 GMI 与 GFO-1 基因之选殖与Pichia pastoris 之异源表现，硕士论文，台湾大学微生物与生化学研究所。
4. 许瑞祥，1993，灵芝概论，万年出版社。
5. 许瑞祥，1990，灵芝属菌株监定系统之研究，博士论文，台湾大学农业化学研究所。
6. 许宗铭，1998，灵芝菌转形系统之研究，硕士论文，中兴大学植物学研究所。
7. 戴意仁，2005，灵芝属漆氧化酶基因之选殖与异源表现，硕士论文，台湾大学微生物与生化学研究所。
8. 黄玉儒，2003，灵芝免疫调节蛋白的作用机制及其减缓尘蟎致敏之应用，硕士论文，中山医学大学毒理学研究所。
9. Abadulla E, Tzanov T, Costa S, Robra KH, Cavaco-Paulo A, Gubitz GM. 2000. Decolorization and detoxification of textile dyes with a laccase from Trametes hirsuta. Appl Environ Microbiol. 66(8): 3357-62.
10. Burns C, Gregory KE, Kirby M, Cheung MK, Riquelme M, Elliott TJ, Challen MP, Bailey A, Foster GD. 2005. Efficient GFP expression in the mushrooms Agaricus bisporus and Coprinus cinereus requires introns. Fungal Genet Biol. 42: 191-9.
11. Chang ST. 2005. Ganoderma lucidum: A prominent source for the healthcare market in the 21th century. Proceedings of the first Symposium on development of China's medicinal fungi industry. pp. 15-27.
12. Chen X, Stone M, Schlagnhaufer C, Romaine CP. 2000. A fruiting body tissue method for efficient Agrobacterium-mediated transformation of Agaricus bisporus. Appl Environ Microbiol. 66:4510-3.
13. D'Souza TM, Merritt CS, Reddy CA. 1999. Lignin-modifying enzymes of the white rot basidiomycete Ganoderma lucidum. Appl Environ Microbiol. 65(12): 5307-13.
14. Haak-Frendscho M, Kino K, Sone T, Jardieu P. 1993. Ling Zhi-8: A novel T cell mitogen includes cytokine production and upregulation of ICAM-1 expression. Cell immunol. 150(1) : 101-133.
15. Hirano T, Sato T, Yaegashi K, Enei H. 2000. Efficient transformation of the edible basidiomycete Lentinus edodes with a vector using a glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter to hygromycin B resistance. Mol Gen Genet. 263: 1047- 52.
16. Hsu HC, Hsu CI, Lin RH, Kao CL, Lin JY. 1997. Fip-vvo, a new fungal immunomodulatory protein isolated from Volvariella volvacea. Biochem J. 323 (Pt 2) : 557-65.
17. Hsu HY, Hua KF, Lin CC, Lin CH, Hsu J, Wong CH. 2004. Extract of Reishi polysaccharides induces cytokine expression via TLR4-modulated protein kinase signaling pathways. J Immunol. 173(10): 5989-5999.
18. Janusz MJ, Austen KF, Czop JK. 1989. Isolation of a yeast heptaglucoside that inhibets monocyte phagocytosis of zymosan particles. J Immunol. 142: 959-65.
19. Kim S, Song J, Choi HT. 2004. Genetic transformation and mutant isolation in Ganoderma lucidum by restriction enzyme- mediated integration. FEMS Microbiology letters, 233: 201-4.
20. Kim HW, Kim BK. 1999. Biomedicinal triterpenoids of Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P Karst. (Aphyllophoromycetideae). Intl J Med Mushrooms, 1:121-138.
21. Ko EM, Leem YE, Choi HT. 2001. Purification and characterization of laccase isozymes from the white-rot basidiomycete Ganoderma lucidum. Appl Microbiol Biotechnol. 57(1-2): 98-102.
22. Kino K, Yamashita A, Yamaoka K, Watanabe J, Tanaka S, Ko K, Tsunoo H. 1989. Isolation and characterization of a new immunomodulatory protein, Ling Zhi-8(LZ-8), form Ganiderma lucidum. J Biol Chem. 264: 472-478.
23. Kino K, Mizumoto K, Sone T, Yamaoka J, Watanabe A, Yamashita K, Yamaoka K, Ko K, Tsunoo H. 1990 . An immunomodulatory protein, Ling Zhi-8, prevents insulitis in non-obese diabetic mice. Diabetologia. 33: 713-8.
24. Ko JL, Hsu CI, Lin RH, Kao CL, Lin JY. 1995. A new fungal immunomodulatory protein, FIP-fve isolated from the edible mushroom, Flammulina velutipes and its complete amino acid sequence. Eur J Biochem. 228(2): 244-9.
25. Kubota T, Asaka Y, Miura I, Mori H. 1982. Structures of ganoderic acids A and B, two new lanostane type bitter triterpenes from Ganoderma lucidum (Fr.) Karst. Helv Chim Acta. 65: 611-619.
26. Larsson S, Cassland P, Jonsson LJ. 2001. Development of a Saccharomyces cerevisiae strain with enhanced resistance to phenolic fermentation inhibitors in lignocellulose hydrolysates by heterologous expression of laccase. Appl Environ Microbiol 67(3): 1163-70.
27. Leonowicz A, Cho NS, Luterek J, Wilkolazka A, Wojtas-Wasilewska M, Matuszewska A, Hofrichter M, Wesenberg D, Rogalski J. 2001. Fungal laccase: properties and activity on lignin. J Basic Microbiol. 41(3-4): 185-227.
28. Lei LS, Lin ZB. 1992. Effect of Ganoderma polysaccharides on T cell subpopulations and production and production of interleukin 2 in mixed lymphocyte response. Acta Pharmaceuica Sinica, 27(5): 331-5.
29. Lei LS, Lin ZB. 1991. Effect of Ganoderma polysaccharides on the activity of DNA polymerase αin spleen cells stimulated by alloantigens in mice in vitro. J Beijing Medical University 23(4): 329-33.
30. Li L, Steffens JC. 2002. Overexpression of polyphenol oxidase in transgenic tomato plants results in enhanced bacterial disease resistance. Planta 215(2): 239-47.
31.Lieu CW, Lee SS, Wang SY. 1992. The effect of Ganoderma lucidum on induction of differentiation in leulsemic U937 cells. Anticancer Res. 12(4) : 1211-5.
32. Lin YL, Liang YC, Lee SS, Chiang BL. 2005. Polysaccharide purified from Ganoderma lucidum induced activation and maturation of human monocyte-derived dendritic cells by the NF-kappaB and p38 mitogen-activated protein kinase pathways. J Leukoe Biol. 78(2): 533-43.
33. Miyasaka N, Inoue H, Totsuka T, Koike R, Kino K, Tsunoo H. 1992. An immunomodulatory protein, Ling Zhi-8, facilitates cellular interaction through modulation of adhesion molecules. Biochem Biophys Res Commun. 186(1) :385-90.
34. Mizuno T, Sakai T, Chihara G. 1995. Health foods and medicinal usages of mushrooms. Food Review International, 11 (1) : 69-81.
35. Mougin C, Boyer FD, Caminade E, Rama R. 2000. Cleavage of the diketonitrile derivative of the herbicide isoxaflutole by extracellular fungal oxidases. J Agric Food Chem. 48(10): 4529-34.
36. Servili M, De Stefano G, Piacquadio P, Sciancalepore V. 2000. A novel method for removing phenols from grape must. Am J Enol Vitic. 51: 357-361.
37. Sun L, Cai HQ, Xu WH, Hu YL, Gao Y, Lin ZP. 2001. Efficient transformation of the medicinal mushroom Ganoderma lucidum. Plant Molecular Biology Reporter, 19: 383-4.
38. van der Hem LG, van der Vliet JA, Bocken CF, Kino K, Hoitsma AJ, Tax WJ. 1995. Ling Zhi-8: studies of a new immunomodulating agent. Transplantation 60(5): 438-43.
39. Wang G, Zhang J, Mizuno T, Zhuang C, Ito H, Mayuzumi H, Okamoto H, Li J. 1993. Antitumor active polysaccharides from the Chinese mushroom Song Shan Lingzhi, the fruiting body of Ganoderma tsugae. Biosci Biotech Biochem. 57 (6): 894-900.
