灵芝酸 C2 已证实在动物实验具有缓解肝脏毒性之作用，如果能够分析灵芝产品中灵芝酸 C2 的含量，具有指标作用。不同种类灵芝所含的灵芝酸 B 及 C2 具有某种程度分类上的意义，而不含 B 及 C2 之种类则需另外建立基本指标成分，作为未来灵芝品质之标准。
文／苏庆华
◎ 本文原载於1999年4月《健康灵芝》第4期 16～20页
近年来研究已逐渐发现灵芝具有多醣体、免疫蛋白及三萜类等多项生理活性物质，而其中又以三萜类最具丰富性，目前监定之成分超过百余种，但其中仅了解少数几种成分的部分生理活性。
另一方面，古籍资料也显示灵芝具有「轻身不老」之效，这様的描述好像多少与肝脏功能有关，因此灵芝对肝脏之影响，也是极具开发性之研究。尤其国人在高度竞争之生活压力下，难免造成肝脏之过度负担，而对於种类丰富之三萜类更具开发价值。
在先前之试验及报告中，显示灵芝含三萜类之酒精萃取物具有缓和动物肝脏毒性之作用（1, 2），笔者亦证实，由 Ganoderma tsugae 子实体中纯化出之灵芝酸 C2 为缓和肝脏毒性之主要成分之一（3）。由先前之研究也得知，不同种类灵芝具有不同之三萜类含量及图谱，也就是说，不同的灵芝三萜类之种类及含量均可能不同。每一种灵芝所含之灵芝酸 C2也可能相异，其缓和肝脏之作用也可能因而改变。
为了解不同种类灵芝所含灵芝酸 B 及 C2 之含量，共收集包含不同产地灵芝子实体 64 种，进行灵芝酸 B 及C2 之分析。分析结果将有助於灵芝原料及制品之品管，亦可推测不同灵芝可能的保护肝脏效用。
灵芝酸 B 及 C2 均属於三萜类，Kohda（4）於 1985 年由 G. lucidum 子实体中纯化监定，笔者实验室於 1992 年亦自 G. tsugae 中分离得到相同的成分。灵芝酸 B 及C2 之构造（图一）十分相似，经常伴随出现，通常灵芝酸 B 较高，因此在分析灵芝酸 C2 时，灵芝酸 B 虽然没有保护肝脏之功能，但亦可同时分析，亦可作为化学分类之参考。
材料的取得及方法
材料来源包括野外采集，购自菌种保存中心（CCRC）之菌种栽培，及农业试验所植病系彭金腾主任所赠之子实体 64 种，可归纳成 G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe、G. calidophilum、G. mastosporum、G. weberianum、G. pfeifferi、G. resinaceum、G. lucidum、G. tropicum、G. subamboinense、G. boniense、G. fornicatum、G. tsugae、G. curtisi、G. lobatum、G.mirabilis、G. oerstedii 等 18 个生物种。
在众多子实体様品中，除了紫芝亚属之 G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe，以及子实体颜色较深之 G. webenanum 之外，其外观不易由子实体之形态来加以区分。因此其三萜类之分析图谱亦可作为监定工具之一。
如以菌类采集地加以区分，则以台北、苗栗、台中、南投、台南，以及台东全岛所得之种类为多，另有北美、南美、南亚及西欧所得之种类，其中 G. lucidum 共有 13 个标本，分别来自台湾东部、台湾西部、南亚及美洲，此 4 个不同来源的菌株间均可交配并且产生下一代。
取子实体每种 2.0 g 於酒精萃取後浓缩至乾燥後，再以 1.5 mL 甲醇溶解後，进行高效液相色层分析仪（HPLC）分析。灵芝酸 B 及 C2标准品为先前由本研究室所纯化，并经由 HPLC 检查测定。
HPLC 条件以 C-18 管柱（Lichrosphere 100, Merck）分析，移动相为 30% Acetonitrile : 1% Acetic acid ＝ 99：1。管柱恒温控制於 42℃，流速定为 1 mL / min，并以 UV254 nm 侦测，每様品记录 1 小时。
灵芝酸 B 及 C2 的含量会随灵芝的种类与生长地区而异
在分析 64 个子实体様本後，其中 39 个标本含有灵芝酸 B 及 C2，其余 25 个标本则无法测得此二种灵芝酸。有趣的是，在所有子实体中，如果具有灵芝酸 B ，也就会出现灵芝酸 C2，显示此二种灵芝酸可能共有生合成途径。
无法测得灵芝酸 B 及 C2之种类包括：G. neo-japonicum（3 个标本），G. formosanum（1 个标本），G. australe（1 个标本），G. calidophilum（1 个标本），G. mastosporum（2 个标本），G. weberianum（7 个标本），G. pfeifferi（1 个标本），G. resinaceum（1 个标本），G. lucidum（6 个标本），G. subamboinense（1 个标本）。含有灵芝酸 B 及 C2 之种类如图二。
（点选图片可放大）
由灵芝酸 B 及 C2 之含量，似乎可以看到此二种三萜类与生物种之某些关系，但其中存在一些矛盾。其中最明显的发生在 G. lucidum，在分析过程中有 6 个属於 G. lucidum 之种类不含 B 及 C2，但另外 7 个则含有 0.1～0.2 mg/g 不等之灵芝酸 B 及 C2。但如追查其采集来源，则发现原产地在北美、印度及台湾东部之 G. lucidum 均无法测得此二种灵芝酸，而产生 B 及 C2 之种类则全部来自台湾西部。
类似的情况也发生 G. resinaceum，产自西欧之两种具有 B 及 C2之生产能力，而来自南亚的则无法测得。由於源自台湾东部、台湾西部、南亚及美洲菌种之四个不同来源的菌株间，在实验室中均可以经由单孢子品系相互交配成为双核菌丝，并且产生下一代子实体，然而其灵芝酸 B 及 C2则迥异，显然由於生物亚种之间经过长时间之隔离後，逐渐演化成不同的三萜类，不过它们仍保持原始的交配型。
至於不同种类交配之下一代子实体，会产生哪一种形态之三萜类，成为十分有趣之研究课题。同为 G. lucidum 这一组材料可作为菌种起源分布及演化之可能证据。至於产生灵芝酸 B 及 C2之种类是较为进化或较原始，目前尚无法得知，但如果由三萜类图谱之复杂程度为演化之指标，则可能找得到某些暗示。
由 HPLC 分析三萜类的图谱差异性
可作为区别不同种灵芝之依据
在此兹举两个例子加以说明，其中之一为 G. lucidum（CCRC-36144）这一原产美国様品之 HPLC 图谱，取其 20 mL 之酒精萃取様品分析，所得到之分析图只显示一些靠左一群极性较大的一些 254 nm 吸光物质，其余则一片空白，显示在分析范围内，只有很少的物质通过（图三）。
而另一个极端的例子则为 G. lobatum（CCRC-42985）原产地为加拿大，则产生极丰物的物质，在同様分析条件下，可供分析之峰有数十个，而且灵芝酸 B 及 C2 之含量很高（图四）。
同様产於北美的两个灵芝种即有极大的 HPLC 图谱差异性，也就是说，每种灵芝在三萜类含量上的差异不仅存在於灵芝酸 B 及 C2，也同时存在於其他类型之三萜类或其他物质。这种差异性是否为一种稳定的性状，作为区别不同种之依据，根据笔者累积之经验，认为是一种可行而方便的方法。
虽然有许多学者认为，三萜类属於微生物的二级代谢产物（secondary metabolite），其再现性有待斟酌，不过以灵芝的生活史中，经由菌丝之支持成长到一定阶段後，产生子实体，期间菌丝体累积足够的三萜类前驱物质，才能达到出菇（由无性世代转到有性世代）产生子实体。
因此如果说三萜类是灵芝菌丝的二级代谢产物，但它又是出菇所需的物质，则可定义为子实体的一级代谢产物（primary metabolite）。因为经由 HPLC 或 TLC 的分析实证，在判断菌种的种类几乎没有例外，尤其以三萜类含量丰富的种类更为清楚。
大致而言，分类上偏向紫芝亚属的灵芝，包括：G. neo-japonicum、G. formosanum、G. australe，或子实体颜色较深之 G. webenanum，都分析不到灵芝酸 B 及 C2。而 G. tsugae 一群则稳定而且较高量产生此二种三萜类。一般而言，同一标本中之灵芝酸 B 高於灵芝酸 C2，但在 G. resinaceum、G.mirabilis 及 G. oerstedii 则有相反之情形，是否具有分类上之意义还有待查证。
在 G. tsugae 中，灵芝酸 B 及 C2 之含量也有明显差别，由 0.1 mg/g 到 1.7 mg/g 均有，但整体平均仍远高於 G. lucidum 及 G. tropicum 等台湾常见之种类。至於子实成熟度与 B 及C2之关系，笔者亦曾初步分析，大致以担孢子释放前达到最高峰，但详细之结果仍有待进一步研究。
具有保肝作用的灵芝酸 C2，以及常与之共生的灵芝酸 B，
可作为灵芝采收时间和产品品管之指标
至於是否灵芝酸 C2 含量高的种类，就是缓和肝脏毒性效果最佳的种类，也不尽然。一般而言，如果单独使用灵芝酸 C2 之效果相当不错（约 50% 之缓和效果），但不含灵芝酸 C2 的灵芝种类也多少具有 20～25% 之缓和效果。显示灵芝酸 C2 不是唯一具有缓和肝脏毒性的有效成分，也就是说，在众多三萜类或类似成分中，仍有许多是值得进一步探索的。
不过国内的栽培种一般都采用 G. tsugae 及 G. lucidum，亦即都具有灵芝酸 B 及 C2，因此笔者也建议将灵芝酸 B 及 C2 作为灵芝产品的指标，因为在大量萃取灵芝子实体过程中，如果灵芝酸 B 及 C2 能够萃取出来，其他类似的成分也都会同时取得。因此，无论在子实体采收时间、原料购入、加工过程之管控及成品品管，均可以在一天内得到结果。
由64种灵芝种类中分析灵芝酸 B 及 C2 的结果显示，在收集的 18 个生物种子实体中，9 种不含此二种三萜类成分，而含三萜类的 9 种生物种中，灵芝酸 B 的含量最高为 1.8 mg/g，分析到最小量为 0.01 mg/g，而灵芝酸 C2 最高为 1.3 mg/g，最少为 0.009 mg/g，相差百倍之多。其确定的分类及演化关系，则有待进一步确认。
灵芝酸 C2 已证实在动物实验具有缓解肝脏毒性之作用，如果能够分析灵芝产品中灵芝酸 C2 的含量，具有指标作用。不同种类灵芝所含的灵芝酸 B 及 C2 具有某种程度分类上的意义，而不含 B 及 C2 之种类则需另外建立基本指标成分，作为未来灵芝品质之标准。
参考文献
1. 林宏伟，1986，肝炎生药之研究，台北医学院药学研究所硕士论文。
2. 詹美华，1992，松杉灵芝三萜类纯化对小白鼠急性肝障碍排除之影响。台北医学院医学研究所硕士论文。
3. Su CH, Lai MN, Chan MH. 1993. Hepato-protective triterpenoids from Ganoderma tsugae in Murrill. In: Mushroom Biology and Mushroom Products, Edited by Chang ST, Buswell JA, Chiu SW. The Chinese University Press, Hong Kong, pp. 275-283.
4. Kohda, et al. 1985. The biologically active constituents of Ganoderma lucidum histamine release-inhibitory triterpenes. Chem. Pharm. Bull. 33: 1367-1374.
延伸阅读
1. 〔苏庆华谈三萜〕从化学结构看灵芝三萜类的生理活性
2. 〔苏庆华谈三萜〕多样的化学构型，造就灵芝三萜类丰富的生理活性
3. 〔苏庆华谈三萜〕灵芝菌丝体是否含有三萜类？
